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用弧菌藻毒凈控制弧菌實踐中的TCBS檢測誤區

2018/1/16 10:14:19   文章來源:強微生物科技   瀏覽次數:1235
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   常常有用戶說,用了我們弧菌藻毒凈等產品3天后,說明書上說是抑制弧菌和鏈球菌的,使用3天后,水體中會基本檢測不到弧菌,但為什么用過后,用TCBS培養基來檢測發現綠色的弧菌消失了,但卻發現黃弧菌落增加了很多,最終結果證明,那個黃色菌落是乳酸菌造成(是乳酸菌菌落),并不是真正的黃弧菌,具體解釋如下:

    1.弧菌藻毒凈產品主要以固態發酵工藝培養的糞腸球菌為主,固態發酵培養乳酸菌技術是強微獲得2014年國家創新基金的專項技術,能以固態培養方式,得到300億/克含量以上的乳酸菌活菌,固態培養的乳酸菌的特點是:1.活力高,在水中可以迅速適應和繁殖;2.本身是分解糞便類的乳酸菌,糞腸球菌是從動物后腸和糞便中提取出來的乳酸菌,可迅速幫助改善水質,分解糞便和有機碎屑;3.第三就是比較強烈的抑制水體中的弧菌和鏈球菌。
    2.即使是乳酸菌(乳酸菌在自然界中有幾百種 ,乳酸菌這個名字只是一個統稱),也必須是糞腸球菌為主的產品,對弧菌和鏈球菌才有效,而象植物乳桿菌,嗜酸乳桿菌,則效果甚微;
    3.必須達到較高的使用量,才能有抑制弧菌和鏈球菌的效果,即必須達到相對優勢的菌群才有效,這個量就是每立方米水體中投入乳酸菌至少50億個乳酵菌才有效,而用弧菌藻毒凈一包一 畝的話,可達到224億/毫升,因為弧菌藻毒凈的糞腸球菌含量是300億/克,一包500克即150000億/為,一畝一米水深的話是667立方米,相除后得到224億/立方米,所以,一般要完全抑制弧菌的話,一包1-2畝都是可以的;

    使用我們的弧菌藻毒凈,每25天使用一次,基本上可以保證乳酸菌在水體中的絕對優勢并保持25-40天優勢,保證沒有弧菌發生;緊急情況下使用弧菌藻毒凈一次;

   關于用TCBS培養基檢測弧菌中,很多用戶用了弧菌藻毒凈后檢測,發現綠弧菌是沒有了,黃弧菌卻比之前還更多,甚至是密密麻麻的存在,但這里要說清楚的是,平板上培養出來的黃弧菌,并不是真正的黃弧菌,而恰恰正是我們的乳酸菌(糞腸球菌);
    這里完全是一個誤會,因為直接用我們的弧菌藻毒凈產品去這個TCBS培養基上劃線檢測的話,長出來的就是黃色的菌落,全部都會被錯認為是黃弧菌,但公司不可能專門去生產黃弧菌呵,這就是乳酸菌而已,因為TCBS培養基的原理是:使用膽酸鹽和牛膽汁粉來抑制革蘭氏陽性菌(乳酸菌是革蘭氏陽性菌),以溴麝香草酚蘭和麝香草酚蘭為pH指示劑,變色范圍pH6.0(黃)~7.6(藍綠),以蔗糖為碳源,通過發酵培養反應造成PH的變化(降低),從而促使溴麝香草酚蘭顯出不同的顏色(黃色);
     現在問題來了,強微公司產品中的乳酸菌活力強,是耐膽鹽耐膽酸的,且可發酵蔗糖,產酸能力很強,能把TCBS培養的PH降低到5以下,所以,培養后呈黃色,讓人們誤以為是致病性弧菌(如溶藻弧菌,或霍亂弧菌,哈維氏弧菌),建議您此時取黃色菌落于高倍顯微鏡下進行觀察,呈圓形的為我們的乳酸糞腸球菌、屎腸球菌,呈弧形或逗點狀的才是致病性弧菌;或進行革蘭氏染色試驗,因為弧菌是革蘭氏染色陰性菌,而乳酸菌是革蘭氏染色陽性菌,這樣也可以區別開來。
     然后又有人要問了,特別是我們遇到一家對蝦育苗場的技術總監不斷追問,他說他們用了國內兩家公司的乳酸菌產品,而且是比較知名的公司的乳酸菌產品,在TCBS培養基上都沒有這個現象,為什么就你們公司的乳酸菌有這個變黃菌落的現象呢,這讓我真的無言以對,只好向他索取那兩家公司的樣品,拿回來檢測一看,這兩家公司的乳酸菌含量都嚴重不足,且遠遠低于這兩家公司標注的分析保證值,繼續試驗后證明,這兩家公司的乳酸菌也不耐膽酸鹽(這樣在TCBS培養基上就根本長不出來),所以,很顯然,這就解釋了為什么這兩家公司的乳酸菌在TCBS培養基長不出來(自然也就沒有黃色菌落了),而為什么我公司的乳酸菌可以在TCBS培養基上長出黃菌落來(因為我們的乳酸菌是耐膽酸鹽的,活力很強),我向這個技術總監解釋了此事,他也承認我們的產品解決了困擾他的氨氮和亞鹽超標問題,對蝦苗也一直非常良好,各項指標都不錯;但最終仍然因為害怕或別的原因或溝通不暢等原因,而不接受我們的產品。
     以上是我們公司在推廣產品中遇到的最頭痛的問題,造成了極大的誤解誤會;例如在TCBS培養基上檢測,因為用了我們的乳酸菌產品,黃色菌落增加是肯定的結果;

   用TCBS培養基檢測弧菌中的注意事項:
    國家檢測副溶血弧菌(綠弧菌)的標準GB4789.7-2013中明確規定:必須在培養18~24小時以內觀察有無綠色菌落,否則會受雜菌影響而判斷無效,所以這一點也需要注意,一定要在24小時以內觀察的才有效,超過24小時的,不管是變黃還是變綠,都是無效判斷,因為超過24小時后,隨著雜菌的進入,會造成培養基中代謝產物的成分變化巨大,并從而產生各種顏色,包括變成綠色都有可能,從而造成可能誤會為綠弧菌,所以,國家標準規定,必須在24小時以內觀察的才有效。

    另外,我們在廣東湛江有一個對蝦養殖大戶,用了我們的弧菌藻毒凈之后,他說弧菌檢測不到了,產品效果非常好,我們馬上就此事聯系到他,想了解是否還有其他的檢測弧菌的方法,以避開TCBS培養基的誤會,哪知道,他也是用TCBS培養基來檢測弧菌的,只是他說,他不在乎黃弧菌,他在乎的是綠弧菌,他說,黃弧菌不可怕,怕的是綠弧菌,如果一旦有綠弧菌出現,則對蝦肯定會出問題,用了強微公司的弧菌藻毒凈之后,基本上檢測不到綠弧菌了,他的對蝦也生長良好,從未出過事;
    以下是他發來的檢測圖:(使用產品后黃色菌增加,但主要是耐膽酸鹽的乳酸菌形成的黃色菌落,在黑暗下不會發光)

使用產品之前則有綠弧菌,如下圖

使用弧菌藻毒凈后,沒有了綠色的菌落了,但黃色的菌落仍然存在,如下圖

 

    我公司技術部做的TCBS培養乳酸菌試驗,從圖可以看到,變黃的區域PH很低,而沒有變黃的區域PH較高,但由于存放時間有5天了,所以,也有雜菌菌落存在,并不是綠弧菌

直接用我們的乳酸菌劃線的TCBS培養結果

您也可以在顯微鏡下觀察,在1000倍以上的顯微鏡下觀察乳酸糞腸球菌和屎腸球菌,是球形的,如下圖

而弧菌是弧形的,或逗點狀的;如下圖

 



 


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