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                   2008年3月6日

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光合細菌的培養操作教程

2013/5/27 13:49:08   文章來源:強微生物科技   瀏覽次數:21347
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光合細菌培養技術高清視頻網址://www.exmuo.icu/show.asp?newsid=2371

 

1、配制光合細菌菌液:

(1)配制比例:

光合細菌培養基、清水、菌種的配制比例為:0.5:80:20。

示例1: 0.5公斤(500克)培養基 + 80升水 + 20升菌種(接種),配成100升的光合細菌菌液。

示例2(少量培養): 0.05公斤(50克)培養基 + 8升水 + 2升菌種(接種),配成10升的光合細菌菌液。

(2)配制方法:

下面以配制100升光合細菌菌液為例來說明配制方法:

① 溶化培養基:取培養基0.5公斤(500克),用少量水溶化(可以用50℃左右的熱水,溶化培養基的速度會快些),攪拌均勻,然后倒入一個容量在100升以上的容器中;

② 配制培養液:往容器中加水到80升,80升培養液配制完成;

③ 接種:再加入20升菌種,并攪勻, 100升菌液配制完成;

④ 裝瓶(袋):將配制好的菌液裝入干凈的透明容器(瓶、壺、塑料袋等),容器中留5%的空氣在里面,密封待用。

菌液配制說明及注意事項:

a. 以上各成分的數量是以配制100升菌液為例來說明配制方法的,如配制其他數量的光合細菌菌液,各成分數量按比例增減即可;

b. 培養用水源的選擇:

一般含雜菌較低的清潔淡水、海水或加粗食鹽的淡水都可以,如井水、河水、自來水、蒸餾水和純凈水等,甚至干凈的池塘水也行。

從經濟、實用的角度考慮,地下水(如井水)含雜菌低,是最理想的培養水源;

清潔的地表水也可使用,如河水、池塘水等;

含氯量較高的自來水應敞口放置兩天或調PH值至偏堿后使用;

蒸餾水及純凈水固然很好,但成本太高,可用于提純菌種;

c. 培養用容器的選擇:

必須為透明容器并清洗干凈,透明的容器可讓光合細菌最大限度的吸收到充分的光線,少量培養如飲料瓶、食用油壺等,規模培養如透明塑料桶、透明塑料袋等。

d. 菌種的接種量:

一般接種量為20-50%,即培養液與菌種的比例為4:1(4升培養液加1升菌種)到1:1(1升培養液加1升菌種),接種量最低不能低于20%。

接種量越高,光合細菌菌種越容易形成優勢菌群而抑制其他雜菌生長,培養速度快,且培養成熟的濃度更高。但產出效率也越低,光合細菌易老化。

接種量越低,培養產出效率越高,但如果低于20%的接種量,光合細菌不容易形成優勢菌群,培養初期易染雜菌,培養的成功率低。

我們推薦的接種量為20%,如果用太陽光培養,推薦的接種量為25-40%。

e. 容器不要裝滿培養液,留5%左右的空氣在里面;實踐證明, 光合細菌在微厭氧的條件下生長最好,也就是說,要留有一定的空氣給它,又要適度的密封,光合細菌長得最好,還便于搖動均勻, 留一點空氣在容器內,反而比不留空氣長得快。

f. 如果有條件,您手上有PH試紙的話,可以測一下配好的菌液的PH值,一般菌液PH值在6.5-7.5之間;

2、光照培養:

通過以上操作,我們就有了配制好了的光合細菌菌液,現在,我們就要對菌液施以光照,這樣,光合細菌有了培養基的營養物質,又獲得了光照的能量,滿足了光合細菌生長所需要的條件,光合細菌能夠得到快速的生長和繁殖。

通過光照,菌液中的光合細菌開始生長,生長過程中,紅色會越來越深,菌液越來越渾;幾天后,菌液長成深紅色并呈渾濁狀態即為成熟,此時PH值為8.0-9.0。

根據您培養的數量,培養方法分為少量培養和規模培養;根據光照光源的不同,可分為燈泡培養和太陽光培養。

(1)少量培養:

如果您初次接觸光合細菌,手上用于培養的菌種數量少,或者平時光合細菌用量較少,您可以采用少量培養的方法。

少量培養多使用白熾燈泡作光源,用白熾燈泡培養穩定性高,培養出來的光合細菌質量好,菌液濃度高,顏色鮮艷,可用作規模培養用的菌種。

少量培養方法非常簡單,在氣溫高于30℃時(如夏季或春秋季里較熱的時節),只需將菌液瓶圍成一個圈,中間吊一個40-100W的白熾燈泡(鎢絲燈,可發熱的),燈泡與瓶子距離在10-20公分,準備一個溫度計監測培養溫度,控制培養溫度在30-38℃之間;

在氣溫低于30℃時(如冬季或春秋季里較冷的時節),我們可以使用紙箱保溫培養,或用塑料布將全部菌液和燈泡遮蓋起來以保溫。

使用紙箱培養,用白熾燈泡作光源對菌液進行光照,同時燈泡本身發熱,紙箱起保溫作用,可提升紙箱內溫度。

制作培養用紙箱:準備一個紙箱(如電腦紙箱、電視機紙箱等),紙箱頂部開一小半口(方便取放菌液瓶子),紙箱中間懸掛一個40-100瓦的白熾燈(鎢絲燈,可發熱的),在紙箱側邊鉆一個小洞,從小洞中插入一根溫度計(方便掌握箱內溫度),如右圖:

箱內控制培養溫度在30-38℃之間,溫度太高可以在紙箱上戮孔散熱或敞開培養,溫度太低可以蓋住紙箱上口,或在紙箱外用保溫材料(如舊衣服、舊棉被等)加以包裹以提升箱內溫度。

少量培養說明及注意事項:

① 燈泡與瓶子距離在10-20公分,太遠光照強度弱,太近光照太強;

② 控制培養溫度在30-38℃(菌液溫度在28-35℃),最高不超過40℃,最低不低于25℃

③ 菌液瓶子至少每天搖動2次。

④ 由于熱脹冷縮,在培養一天后,可以旋開瓶蓋,放氣排壓,再蓋上。

⑤ 培養好的光合細菌,又可以當菌種用,無限循環培養下去,不會老化或退化。菌種要保存好,放在陰涼干燥有光線的地方,同時要注意:夏天三個月、其他季節六個月要轉培養一次,以保證菌種活力。

(2)室內規模培養:

在地面制作小池子,用來固定將要放在里面的塑料培養袋(也可以用木方來固定),將菌液裝入塑料薄膜袋子中(可以使用蝦苗袋子),塑料薄膜袋子兩頭密封好,進行培養,見右圖:

使用60-100瓦白熾燈,燈與液面距離為20公分左右,每平方米用2-3個,室內設置加熱裝置,夏天則不需要,主要是冬天需要加熱,北方有暖氣片,南方可以使用煤爐(注意把煤氣用管道排出室外),南方冬天也可以用電熱絲,不過比較耗電。

這種方法的缺點是無法攪拌。只能靜止培養,培養時間稍長一點。

(3)太陽光培養:

用太陽光作為光源培養,只需把菌液用一個大的不易破損的塑料袋裝好(注意:使用太陽光培養時,塑料袋的培養成功率最高,其次是5升裝的食用油壺),放在太陽底下曬即可,夏天注意遮蔭降溫,并每天搖晃2次,以防溫度過高燒死菌種。這樣,不需要什么人工,放在那里過些日子就長成深紅色了。

太陽光培養最容易出現的問題是:由于太陽光的光譜很廣,除了有適合光合細菌生長的光線,還有適合其他雜菌生長的光線,如果不采取措施的話,其他雜菌(如綠藻等)也很容易生長和繁殖;另外,夏季太陽光還會造成菌液的水溫過高,高于40℃后光合細菌會大量死亡。

我們可以采用以下措施防止綠藻污染:

1、適當遮蔭,搭蓋一到二層遮陽網,這樣會濾掉大部分適合其他雜菌生長的光線而留下適合光合細菌生長的光線;

2、配制菌液時加大菌種的接種量,例:0.5公斤(500克)培養基 +80升水 +40升菌種(加大接種),配成120升的光合細菌菌液

3、菌液中適量加入一些鹽,每100升菌液加鹽1公斤左右;

4、夏季高溫注意降溫。

注意,即使在培養過程中,出現了綠藻污染,長綠了,也不要放棄或倒掉,讓它去,過一段時間,甚至一個月以上,它自然會長成深紅色的,最終光合細菌會占絕對優勢。

太陽光培養的顏色色澤沒有室內白熾燈培養的好看、鮮艷。所以,如果是培養光合細菌作為商品出售的話,建議使用室內規模培養法,產品質量最穩定,菌液濃度高,顏色最好看,最鮮艷,商品性能好。

如果培養的光合細菌是自己的魚塘使用,則可以采用偷懶一點的方法,即太陽光培養法。

有客戶發明如下培養方法比較簡單:挖一個土坑,深40公分左右,里面墊一層塑料薄膜用來盛培養液,倒入培養液,接好種,控制培養液的深度在30公分以內,再在液面上鋪一層塑料薄膜(可形成一定的密閉環境,防止空氣中雜菌污染),在太陽底下曬數日即長紅,冬天則可在土坑上搭一塑料暖棚保溫,也可在室內做一個這樣的坑池,搭一塑料暖棚,內再放一火爐保溫升溫用,每半平方米懸一個100瓦白熾燈,離液面25公分之內。

陽光太強烈時,可以搭蓋一層遮陽網。夏天防止溫度過高。

光照培養說明及注意事項:

a、培養溫度:

培養溫度(水溫)在15℃-40℃均能生長,培養成熟的時間不同。

15℃-25℃:雖然會生長,但生長速度慢,培養初期容易污染雜菌,菌液很淺;

25℃-30℃:4至6天達到生長旺盛期;

30℃-35℃:3至5天達到生長旺盛期,是比較理想的溫度;

35℃-40℃:2至4天生長旺盛,第5天明顯抑制,附壁下沉,光合細菌易老化;

40℃以上,光合細菌無法耐受,會大量死亡。

最理想溫度(菌液溫度):28℃-35℃,菌液質量最好,3-6天轉為深紅色。

b、培養光照強度:

光照強度1000-6000 lx均可生長,培養成熟的時間不同。

光照強度低于1000 lx,光線不足,速度慢,菌液淺,易污染雜菌。

超過4000 lx,菌液成熟快,易老化,附壁碎片沉淀,不易保存。

最理想1500-4000 lx,菌液質量好,生長速度也較快;

經我們用白熾燈泡測試結果如下:

(以下測試燈泡僅限于我們手中的燈泡,各地燈泡生產廠家和品牌不同會有差距,測試結果僅供參考)

40W白熾燈泡:距10cm處的光強度為1700 lx左右,距20cm處的光強度為600 lx左右;

60W白熾燈泡:距10cm處的光強度為4900 lx左右,距15cm處的光強度為2600 lx左右,距20cm處的光強度為1700 lx左右;

100W白熾燈泡:距10cm處的光強度為6700lx左右,距20cm處的光強度為3200lx左右;

c、培養時間:

第一次培養,可能需要較長的時間(可能6天以上),這是因為菌種有一個適應您當地水源的過程,在不斷培養數代,菌種適應了水源后,可能3-5天就可以了。另外如果菌種放置時間久了,再拿來接種培養也需要較久的培養時間。

培養時間還與培養溫度、光照強度和PH值有關,一般來說,溫度、光照強度和PH值越高,培養時間越短,越低,培養時間越長。

光合細菌生長過程中,紅色會越來越深,菌液越來越渾;幾天后,菌液長成深紅色并呈渾濁狀態即為成熟,此時PH值為8.0-9.0。

d、菌液的攪拌(搖動)

光合細菌培養過程中必須攪拌(搖動),作用是幫助沉淀的光合細菌上浮獲得光照,保持菌細胞的良好生長。

菌液每天至少攪拌(搖動)2次。

每天攪拌(搖動)的次數越多,光合細菌生長得也越快。

e、菌液是否要完全密封培養:

實踐證明, 光合細菌是在微厭氧的條件下生長最好,也就是說,要留有一定的空氣給它,又要適度的密封,如在小規模的紙箱培養試驗中,在飲料瓶中留有5%的空氣,光合細菌長得最好,這樣還便于搖動均勻, 留一點空氣在容器內,反而比不留空氣長得快。

f、太陽光培養:

使用太陽光培養,注意一定不能讓陽光直射到菌液上,可以在屋檐下、大樹下培養,如直接在陽光下應適當遮陰,搭蓋一到二層遮陽網。夏天要防止溫度過高。

g、培養參數總結:

(1)培養基、清水、菌種的比例: 0.5:80:20

例: 0.5公斤(500克)培養基+80升水+20升菌種,配成100升的光合細菌菌液;

(2)盛裝菌液的容器:必須為透明容器并清洗干凈,如飲料瓶、食用油壺、透明塑料桶、透明塑料袋等。

(3)配制成的菌液酸堿度(PH)值:6.5-7.5最佳;

(4)菌液溫度:28℃-35℃最佳(適應范圍15℃-40℃)。

(5)光照度:1500LX-4000LX最佳。每25升菌液使用1個60瓦左右的電燈泡進行光照,菌液距離燈泡10-20cm。

(6)培養好的光合細菌,又可以當菌種用,無限循環培養下去,不會老化或退化。菌種要保存好,放在陰涼干燥地方,同時要注意:夏天三個月、其他季節六個月要轉培養一次,以保證菌種活力。

3、培養過程中菌液可能出現的問題及對策

(1)、變淡

原因:接種量過少,使用的水源含雜菌太多,菌種老化、雜菌過多,PH值過低或過高,光照不足,溫度過低或過高,水的硬度過高。

對策:調節至正常狀態。

(2)、變黑

原因:多見于使用敞開培養的方法,菌液污染了雜菌;或氣溫較高的季節,剛培養好的菌液因長時間失去光照。

對策:更換菌種重新培養或施以光照。

(3)、變綠

原因1菌液中綠硫菌大量繁殖,多見于高溫季節使用太陽光培養而沒有遮陰。

對策:更換菌種重新培養,加大菌種的接種量,使用太陽光培養時搭蓋一到二層遮陽網遮陰,并注意溫度不要超過40℃;還可每100升加入0.1-0.2公斤食鹽(淡水培養)或1-2公斤食鹽(海水培養)。

原因2可能是某些紅螺菌科的某些菌侏,在嚴格厭氧的情況下也會產生此現象

對策:繼續連續多次密閉培養。

(4)、變灰

原因:接種量少,菌種不純,光照不足,PH值過低。

對策:選用優質菌種,按要求接種,增強光照,調適PH值。


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